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银杏叶提取物对动物免疫功能的调节



来源: 日期:2015-03-25 15:14 作者:

  银杏叶为孑遗植物银杏(Ginkgo biloba L.)的干燥叶,其提取物(EGb)含有黄酮类、内酯类、酚类等多种生物活性成分。研究表明,EGb具有抗氧化、拮抗血小板活化因子、抗炎、抗病毒及提高免疫力等多种功能。本文重点阐述了EGb对动物免疫功能的调节作用。 

  1  银杏叶提取物的主要活性成分 

  据报道,目前从银杏叶中提取分离和已证实的化学成分约有200多种,主要有黄酮苷类、萜内酯类、有机酸、单糖类、多糖类、有机醇类、醛类、酮类、生物碱类、甾醇类、17种氨基酸和25种微量元素,以及维生素、叶绿素、胡萝卜素等(高锦明等,1995)。其中黄酮类和萜内酯类等是银杏叶中发挥独特药理活性的有效成分。 

  2银杏叶提取物的免疫调节功能 

  2.1  促进免疫器官的发育  免疫器官是动物机体执行免疫功能的组织结构,是淋巴细胞和其他免疫活性细胞发生、分化成熟、定居和增殖以及产生免疫应答的场所,其生长发育直接影响着机体免疫应答水平和抵抗外来微生物入侵和感染的能力。免疫器官重量的增加是生长发育快的表现,而指数的提高是由于其自身细胞生长发育和分裂增殖所致,意味着免疫系统成熟较快(王世若,1996)。在一定变化范围内,其绝对重量和相对重量越大,说明机体的细胞免疫和体液免疫机能越强(Corwin等,1981)。 

  EGb对动物免疫器官发育影响的报道目前主要集中于大鼠和肉鸡。RivasJulius(1998)报道,脾脏、胸腺和法氏囊的重量可用于评价鸡的免疫状况。覃红斌(2004)认为,EGb能够明显增加大鼠胸腺、脾脏的重量。明亮等(1999)试验表明,EGb能明显增加环磷酰胺引起的免疫功能低下的小鼠胸腺、脾脏相对重量。韦晗宁(2000)大鼠试验研究表明.EGb可以改善白酒灌胃导致的胸腺、脾脏萎缩,减轻酒精对胸腺和脾脏的损害。Tian (2003)研究结果表明,100 mg/mLEGb预处理能够显著降低羟基自由基诱导的原代培养胸腺细胞的凋亡,同时,连续60d口服EGb(每鼠约1.5 mg/d)能够显著刺激22月老龄鼠胸腺的再生长,具体表现在胸腺的重量增加,胸腺细胞的总数量增加,此外,部分外周免疫能力,如丝裂原增殖反应和NK细胞活性也得到了一定的恢复:EGb 还能使胸腺功能得到恢复,相应地增强免疫系统的功能。 

  EGb在肉鸡中的试验也得到了相似的结果。王学静(2006)研究了日粮添加不同剂量EGb28日龄罗斯308雌性肉雏鸡生长性能和免疫器官相对重量的影响,发现日粮中添加600 mg/kg EGb可明显提高肉雏鸡的日增重和料重比,肉雏鸡胸腺、法氏囊、脾脏相对重量较对照组提高了24.70%42.95%39.29% (P<0.05)。杨小燕等(2008)试验表明,0.8%l.O%的日粮EGb能够显著提高35日龄AA肉鸡法氏囊和胸腺指数,对肉鸡中枢免疫器官的生长具有促进作用。林淑慧(2009)的研究表明,日粮中添加不同水平的EGB (0.15%0.2%0.25%)能够不同程度地提高肉鸡的胸腺、脾脏和法氏囊指数,其中以添加0.2%EGb28日龄时提高最多。肠道不仅是营养物质消化、吸收的场所,而且是机体最大的免疫器官,具有重要的免疫功能。李焰等(2009)报道,EGb处理可以改善肉仔鸡肠道微生物区系,改善小肠黏膜形态。可见,EGb能促进正常和免疫力低下动物免疫器官的发育,提高机体的免疫力。 

  2.2  对单核巨噬细胞的免疫调节作用  单核巨噬细胞作为机体非特异性免疫系统的重要组成部分,具有强大的吞噬能力,不仅能吞噬侵入机体内的病原体和有害异物,而且能将抗原递呈给TB 淋巴细胞,从而参与机体的特异性免疫应答。诸多研究表明,EGb能不同程度地通过增强单核巨噬细胞吞噬功能,促进巨噬细胞在免疫应答中起抗原递呈作用,分泌细胞因子,进而调控和扩大免疫反应(覃红斌,2004Villasenor-Garcia等,2004)。沈海中等(1994)用噻唑蓝比色法和髓过氧化物酶微量测定法分别检测了EGb对小鼠淋巴细胞活性和中性粒细胞吞噬杀伤功能的影响,结果发现其可明显增强小鼠淋巴细胞线粒体脱氢酶和中性粒细胞髓过氧化物酶的释放,具有提高小鼠淋巴细胞和中性粒细胞活性的作用。其机制可能是EGb通过抑制巨噬细胞可诱导型一氧化氮合成酶基因表达和活性、降低一氧化氮的合成,从而改善巨噬细胞的功能(Cheung等,2001) 

  2.3  对体液免疫的促进作用  EGb能够促进抗体的生成,增强机体的体液免疫功能。李郁英等(1995)Villasenor-Garcla(2004)报道,EGb可增加大鼠、小鼠抗绵羊红细胞抗体生成细胞数,提高小鼠抗鸡红细胞抗体(溶血素)的水平。潘智鸣等(1997)研究不同剂量的EGb、黄芪提取物和黄芪银杏提取物复方制剂对小鼠特异性抗鸡红细胞抗体(溶血素)的产生和T淋巴细胞转化增殖的影响发现,EGb能促进小鼠产生溶血素,与黄芪的作用十分相似。 

  免疫球蛋白(Ig)是指具有抗体活性或化学结构上与抗体相似的球蛋白,一般存在于血液等多种体液中及某些细胞的表面上。通常检测IgGIgMIgA,这三类Ig就可以代表血清Ig的水平。血清Ig质量浓度或效价的高低反映着机体体液的免疫水平,其质量浓度或效价越高,表示机体的体液免疫水平越高。雷红等(2007)和王学静(2006)试验结果表明,肉鸡日粮中添加不同水平的EGb(0%0.03%0.06%0.12%0.24%0.48%), 各试验组胸腺、法氏囊和脾脏相对重量以及IgAIgG较对照组均有所提高,且以0.06%0.12%的添加量效果最佳。杨小燕等(2008)在肉鸡基础日粮中分别添加0.15%0.2%0.25%EGB的研究结果表明,各试验组IgGIgMIgA含量及补体C3C4的水平较对照组均有所提高,表明EGb可以提高肉雏鸡体液免疫机能。杨小燕等(2008)选择240只健康AA肉仔鸡母雏作为试验动物,在基础日粮中添加0.6%0.8%1.0%EGb.发现0.8%1.0%EGb添加水平能够显著提高35日龄肉鸡新城疫抗体效价。林淑慧(2009)研究结果表明,日粮中添加EGb能够提高肉鸡的生长性能、降低死淘率;提高免疫器官指数及血清IgGIgMIgA、补体C3C4含量,并且以0.2%EGb添加组的效果最显著。明亮等(1999)试验证明,EGb能够明显提高环磷酰胺引起的免疫功能低下的小鼠血清IgG水平。肠道黏膜免疫也是全身免疫的重要组成部分。黄其春等(2011ab)在肉仔鸡试验中表明,日粮中添加质量分数0.20%0.25%EGb 可显著提高42日龄肉仔鸡十二指肠黏膜IgAIgGIgM的含量,表明EGb可增强肉仔鸡肠黏膜的体液免疫反应。黄其春等( 2012b)另一研究结果表明,与对照组相比,添加质量分数0.2%0.3% EGb,总体上可显著提高断奶仔猪血清IgGIgMIgA质量浓度,及断奶仔猪血清补体C3的质量浓度。 

  2.4  对细胞免疫的促进作用  EGb能够促进T 淋巴细胞的增殖,调节T淋巴细胞亚群的平衡,对细胞免疫具有促进作用。覃红斌(20042007)研究发现,EGb能明显增加大鼠胸腺T淋巴细胞比例,促进ConA诱导的脾脏淋巴细胞增殖,提高外周血T淋巴细胞百分率(ANAE染色法)。此外,李德远等(2004)在对受γ射线照射的小鼠上研究发现,银杏黄酮明显提高了其存活率,对经ConALPS刺激的辐照小鼠脾淋巴细胞转化率有明显促进作用。林淑慧(2009)研究结果表明,日粮中添加EGb能够提高肉鸡的外周血、脾脏淋巴细胞转化率,并且以0.2%EGb添加组的效果最显著,且体外试验结果与体内试验结果吻合。淋巴细胞CD3+亚群是成熟T淋巴细胞的标志,CD4+CD8+T 淋巴细胞是获得性免疫系统的中枢组分。广义而言,CD4+亚群是辅助性T淋巴细胞(Th/Ti)的标志。这两类细胞都直接参与特异性细胞免疫反应,而且Th/Ti细胞对细胞免疫反应起激发调控作用。 

  2.5  对细胞因子的调节作用  有关EGb对细胞因子的免疫调节作用是当今EGb研究领域的热点之一。林淑慧(2009)研究结果表明,日粮中添加EGb能够提高肉鸡细胞因子如IL-1IL-2IFN-γ、TNF- a水平,且以0.2%EGb添加组的效果最显著。黄其春等(2011b)试验结果显示,与对照组相比,添加质量分数0.2%0.3% EGb,可显著提高断奶仔猪血清IL-2IFN一γ质量浓度,这与林淑慧(2009)AA肉用母雏鸡的研究结果一致。 EGb也可通过调节细胞因子的水平来增强断奶仔猪的免疫功能。高昱等(1997)、覃红斌(2007) 研究发现,EGb能明显增强老年小鼠和老年大鼠血清IL-6水平。细胞因子的产生在机体免疫应激时有益于机体代谢,但并不是越多越好。EGb对免疫应激状态下细胞因子的分泌也具有调控作用。例如,EGb可通过调节细胞因子(如白细胞介素、肿瘤坏死因子等)的水平来增强机体的免疫功能。郝志宏等(2005)研究表明,EGb能抑制外周血单个核细胞中IL-1IL-6IL-8TNF-a等炎症细胞因子水平,在炎症反应中保护机体器官(郝志宏等,2005)。张中等(2006)研究了EGb对小鼠腹腔巨噬细胞呼吸爆发及IL-1β、IL-6TNF-aCOX-2 mRNAs和蛋白表达的影响,结果发现.EGb能明显抑制LPS诱导的巨噬细胞分泌IL- 1β、IL-6TNF-a水平,下调IL-1β、IL-6TNF- aCOX-2 mRNAs和蛋白表达。 

  2.6  对黏膜免疫的影响  黏膜免疫系统是机体免疫系统的重要部分。由于黏膜免疫在作用方式和功能上完全不同于细胞免疫和体液免疫,使其具有独特的特点和优势。EGb对黏膜免疫的调节研究相对较少,目前的研究主要集中在增强肠黏膜的保护作用。 

  黄其春等(2011a)试验发现,日粮中添加质量分数0.20%0.25%EGb,可显著增加42日龄肉仔鸡十二指肠上皮内淋巴细胞、肥大细胞、杯状细胞等黏膜免疫相关细胞的数量,说明EGb可以提高肉仔鸡的十二指肠黏膜免疫功能,增强黏膜的屏障作用。其中,杯状细胞和十二指肠杯状细胞增多,表明十二指肠的消化吸收能力增强,部分营养物质在十二指肠的消化吸收速度加快。 

  张建平等(2004)报道,EGb早期腹腔灌注对大鼠急性重症胰腺炎肠黏膜屏障功能具有保护作用。Zhou(2006)、周燕红等(2007)报道,EGb 对三硝基苯磺酸灌肠诱导的大鼠试验性结肠炎具有保护作用,表现为EGb明显改善了肠黏膜充血、水肿、糜烂,黏膜及黏膜浅层仅有少量中性粒细胞、淋巴细胞浸润,其作用机制可能是EGb 能抑制TNF-a诱导NF-KBp65及其下游信号分子诱导型一氧化氮合成酶的激活,削弱其多途径致炎作用及炎症级联,从而有效缓解试验性结肠炎的炎症反应。 

  肠黏膜上皮内淋巴细胞主要为T细胞,其可分泌IL-2等细胞因子,诱导黏膜上皮细胞抗原的表达,参与黏膜免疫应答。黄其春等(2011a)报道,日粮添加EGb可使肉仔鸡十二指肠中IL-2含量增加,这提示肉仔鸡十二指肠黏膜中T细胞数量可能增加,EGb对肉仔鸡十二指肠黏膜细胞免疫和体液免疫具有促进作用。 

  3  小结 

  EGb含有黄酮类、内酯类、酚类等多种活性成分,这些活性物质具有免疫调节功能,能抑制病原微生物,提高动物的生殖能力和生长性能,且提高畜禽的抗氧化应激能力,并具有预防肿瘤发生的作用,其作为一种免疫增强剂,对家畜、家禽的健康和抗病能力有显著的促进效果,且无毒副作用,可广泛用于猪、鸡、马、牛、鱼、虾等多种畜禽、水产动物中。此外,EGb具有改善肉鸡生长性能、提高增重速度、改善饲料转化率、降低腹脂率和改善胴体品质的作用,且超声波法提取速度快,提取率高,溶剂和能耗的用量小。EGb用作饲料添加剂,为银杏开拓新的用途,不仅有利于畜牧业的可持续发展,而且也带动了银杏种植业的发展和农业的增收,达到经济效益、社会效益和生态效益“三丰收”。 

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